La microscopía de fluorescencia ha revolucionado nuestra capacidad para visualizar y estudiar muestras biológicas, permitiéndonos profundizar en el intrincado mundo de las células y las moléculas. Un componente clave de la microscopía de fluorescencia es la fuente de luz utilizada para excitar las moléculas fluorescentes dentro de la muestra. A lo largo de los años, se han empleado diversas fuentes de luz, cada una con sus características y ventajas únicas.
1. Lámpara de mercurio
La lámpara de mercurio de alta presión, de 50 a 200 vatios, está construida con vidrio de cuarzo y tiene forma esférica. Contiene una cierta cantidad de mercurio en su interior. Cuando funciona, se produce una descarga entre dos electrodos, lo que hace que el mercurio se evapore y la presión interna en la esfera aumenta rápidamente. Este proceso suele tardar entre 5 y 15 minutos.
La emisión de la lámpara de mercurio de alta presión resulta de la desintegración y reducción de las moléculas de mercurio durante la descarga del electrodo, lo que da lugar a la emisión de fotones de luz.
Emite una fuerte luz ultravioleta y azul violeta, lo que lo hace adecuado para excitar diversos materiales fluorescentes, razón por la cual se usa ampliamente en microscopía de fluorescencia.
2. Lámparas de xenón
Otra fuente de luz blanca comúnmente utilizada en microscopía de fluorescencia es la lámpara de xenón. Las lámparas de xenón, al igual que las lámparas de mercurio, proporcionan un amplio espectro de longitudes de onda desde el ultravioleta hasta el infrarrojo cercano. Sin embargo, difieren en sus espectros de excitación.
Las lámparas de mercurio concentran su emisión en las regiones casi ultravioleta, azul y verde, lo que garantiza la generación de señales fluorescentes brillantes pero conlleva una fuerte fototoxicidad. En consecuencia, las lámparas HBO suelen reservarse para muestras fijas o imágenes de fluorescencia débil. Por el contrario, las fuentes de lámparas de xenón tienen un perfil de excitación más suave, lo que permite comparar intensidades en diferentes longitudes de onda. Esta característica es ventajosa para aplicaciones como mediciones de concentración de iones de calcio. Las lámparas de xenón también presentan una fuerte excitación en el rango del infrarrojo cercano, especialmente entre 800 y 1.000 nm.
Las lámparas XBO tienen las siguientes ventajas sobre las lámparas HBO:
① Intensidad espectral más uniforme
② Intensidad espectral más fuerte en las regiones infrarroja e infrarroja media
③ Mayor producción de energía, facilitando el alcance de la apertura del objetivo.
3. LED
En los últimos años, ha surgido un nuevo competidor en el ámbito de las fuentes de luz de microscopía de fluorescencia: los LED. Los LED ofrecen la ventaja de un rápido encendido y apagado en milisegundos, lo que reduce los tiempos de exposición de las muestras y extiende la vida útil de las muestras delicadas. Además, la luz LED muestra una decadencia rápida y precisa, lo que disminuye significativamente la fototoxicidad durante experimentos con células vivas a largo plazo.
En comparación con las fuentes de luz blanca, los LED suelen emitir dentro de un espectro de excitación más estrecho. Sin embargo, hay disponibles múltiples bandas de LED, lo que permite aplicaciones versátiles de fluorescencia multicolor, lo que convierte a los LED en una opción cada vez más popular en las configuraciones modernas de microscopía de fluorescencia.
4. Fuente de luz láser
Las fuentes de luz láser son altamente monocromáticas y direccionales, lo que las hace ideales para microscopía de alta resolución, incluidas técnicas de superresolución como STED (Agotamiento de emisiones estimuladas) y PALM (Microscopía de localización fotoactivada). La luz láser normalmente se selecciona para que coincida con la longitud de onda de excitación específica requerida para el fluoróforo objetivo, lo que proporciona una alta selectividad y precisión en la excitación de la fluorescencia.
La elección de una fuente de luz para microscopio de fluorescencia depende de los requisitos experimentales específicos y de las características de la muestra. No dude en contactarnos si necesita ayuda.
Hora de publicación: 13 de septiembre de 2023